- 相關(guān)推薦
硝酸咪康唑搽劑微生物限度檢查法的建立
下面是小編整理的藥學(xué)畢業(yè)論文，歡迎參考與閱讀!
【摘要】 目的 建立硝酸咪康唑搽劑微生物限度檢查法。方法 測(cè)定硝酸咪康唑搽劑對(duì)大腸埃希菌等5種試驗(yàn)菌的回收率，對(duì)2個(gè)控制菌(銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌)的檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 用薄膜過(guò)濾法和0.1%吐溫80-pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液作沖洗劑檢查本品的細(xì)菌總數(shù)、真菌及酵母菌計(jì)數(shù)，其試驗(yàn)菌回收率均達(dá)到70%以上。同樣用該方法檢查本品的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌，其試驗(yàn)組呈陽(yáng)性反應(yīng)，陰性菌對(duì)照組呈陰性反應(yīng)。結(jié)論 用薄膜過(guò)濾法聯(lián)用0.1%吐溫80-pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液作沖洗劑可以消除硝酸咪康唑搽劑在試驗(yàn)條件下的抑菌作用，從而順利檢出該品種所污染的各種微生物。
【關(guān)鍵詞】 硝酸咪康唑搽劑;微生物限度檢查;方法學(xué)驗(yàn)證
微生物限度檢查法是檢查非規(guī)定制劑及原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、真菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查[1]。但具有抑菌成分的藥品由于其抑菌活性的干擾，常規(guī)檢查結(jié)果不能真實(shí)地反映出藥品中污染微生物的情況，必須先消除供試品中的抑菌活性，再根據(jù)《中國(guó)藥典》規(guī)定的方法進(jìn)行檢查，并必須對(duì)所采取的檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)抑菌活性的消除和檢查方法的可靠性。具有抑菌作用的藥品，每個(gè)品種抑菌效果不同，因此適合各個(gè)品種的微生物限度檢查法也不同。
作者曾用常規(guī)法、培養(yǎng)基稀釋法及薄膜過(guò)濾法(用pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖液沖洗)對(duì)硝酸咪康唑搽劑進(jìn)行微生物限度檢查，結(jié)果均不能達(dá)到藥典要求。吐溫80是親水性表面活性劑，具有增溶作用，因此本文選擇用薄膜過(guò)濾法聯(lián)用0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖溶液做沖洗劑檢查該藥品的細(xì)菌、真菌、酵母菌數(shù)和控制菌，結(jié)果滿意，可為同類藥品的微生物限度檢查法提供科學(xué)依據(jù)。
1材料
1.1菌種大腸埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B) 44 102], 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26 003], 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501], 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B) 26 003]，銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10 104]白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F) 980011], 黑曲霉(Asperg illus niger)[CMCC(F) 98003]，由廣東生物研究所提供，菌種代數(shù)均為第3代。
1.2培養(yǎng)基及試劑pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖液、營(yíng)養(yǎng)肉湯、改良馬丁培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、虎紅培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂、二鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試劑、PDP瓊脂培養(yǎng)基、三氯甲烷、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基和革蘭氏染色劑。
1.3樣品硝酸咪康唑搽劑，阿特維斯(佛山)制藥有限公司，批號(hào)：0606950，成分：硝酸咪康唑、玫瑰麝香香精、乙醇、二甲基亞砜。
2方法與結(jié)果
2.1菌液制備[1]
2.1.1取經(jīng)37 ℃ 培養(yǎng)18～24 h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌與大腸埃希菌的肉湯培養(yǎng)物1 mL，加入9 mL 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數(shù)50～100 cfu的菌懸液，做活菌計(jì)數(shù)。
2.1.2取經(jīng)25 ℃培養(yǎng)18～24 h的白色念珠菌液體培養(yǎng)物1 mL，加入9 mL 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數(shù)50～100 cfu的菌懸液，做活菌計(jì)數(shù)。
2.1.3接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7 d，加入3～5 mL 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1 mL含孢子數(shù)50～100 cfu的孢子懸液，做活菌計(jì)數(shù)。
2.2供試液的制備[2]取本品10 mL，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉?蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，作為1∶10的供試液。
2.3驗(yàn)證方法
2.3.1細(xì)菌、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)法回收率的測(cè)定
薄膜過(guò)濾法聯(lián)用0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖溶液作沖洗劑對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，3次獨(dú)立平行試驗(yàn)結(jié)果的均值。
�、僭囼�(yàn)組：取供試液10 mL到薄膜過(guò)濾器中,用無(wú)菌的0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖溶液沖洗3次，每次100 mL, 并在最后1次沖洗液中加入1 mL的試驗(yàn)菌液(50～100 cfu/mL)沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或虎紅培養(yǎng)基平板上，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h或23～28 ℃培養(yǎng)72 h。記錄菌落數(shù)。試驗(yàn)組的菌回收率=(試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù))÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%。
②菌液組[4]：在過(guò)濾器中預(yù)先加入大約20 mL的無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液，再吸取1 mL的試驗(yàn)菌液(50～100 cfu/mL)到過(guò)濾器中，過(guò)濾。再用100 mL無(wú)菌的0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖液沖洗1次，取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或虎紅培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，培養(yǎng)方法同試驗(yàn)組。
�、酃┰嚻穼�(duì)照組：方法同試驗(yàn)組，但不加試驗(yàn)菌液。
�、芟♂寗⿲�(duì)照組：方法與試驗(yàn)組同，其中供試液用pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖液代替。稀釋劑對(duì)照組的菌回收率=稀釋劑對(duì)照組平均菌落數(shù)÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%
表1各試驗(yàn)菌株的回收率 略
從表1可知，在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率、試驗(yàn)組的菌回收率均不低于70%�？捎帽∧み^(guò)濾法聯(lián)用0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖液沖洗方法檢查硝酸咪康唑搽劑的細(xì)菌、真菌及酵母菌數(shù)。
2.3.2控制菌檢查方法驗(yàn)證
�、僭囼�(yàn)組：取供試液10 mL到薄膜過(guò)濾器中, 用無(wú)菌的0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖液沖洗3次，每次100 mL, 并在最后一次沖洗液中加入50～100 cfu的試驗(yàn)菌(驗(yàn)證銅綠假單胞菌時(shí),試驗(yàn)菌為銅綠假單胞菌)，沖洗后取出濾膜放入預(yù)先制備好的相應(yīng)培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法檢查。
�、陉幮跃鷮�(duì)照組：方法同試驗(yàn)組，試驗(yàn)菌改為50～100 cfu陰性對(duì)照菌(2個(gè)控制菌驗(yàn)證的陰性對(duì)照菌均為大腸埃希菌)。
③菌液組 ：在過(guò)濾器中預(yù)先加入約20 mL的無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液，在吸取50～100 cfu試驗(yàn)菌到薄膜過(guò)濾器中，用100 mL 0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖液沖洗1次。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，置(36±1)℃培養(yǎng)48 h，記錄活菌數(shù)[5]。
3次平行試驗(yàn)結(jié)果一致，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
可見(jiàn)，用薄膜過(guò)濾法聯(lián)用0.1%吐溫pH7.080?氯化鈉?蛋白胨緩沖溶液作沖洗劑檢查銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌，方法成立。
3討 論
硝酸咪康唑搽劑為廣譜抗真菌藥，主要含有硝酸咪康唑、乙醇和二甲基亞砜等成分，對(duì)皮膚癬菌、念珠菌等有抗菌作用，對(duì)某些細(xì)菌也有一定抑制作用�！吨袊�(guó)藥典》2005版規(guī)定，對(duì)藥品在微生物限度檢查時(shí)，其方法應(yīng)通過(guò)驗(yàn)證，以確認(rèn)供試品的抑菌活性已被消除而保證檢查方法的可靠性。從本品的微生物限度檢查法的建立研究可見(jiàn)，選用薄膜過(guò)濾法聯(lián)用0.1%吐溫80?pH7.0氯化鈉?蛋白胨緩沖液作沖洗劑來(lái)檢查本品的細(xì)菌數(shù)、真菌、酵母菌數(shù)及控制菌(銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌)的方法有效，在細(xì)菌總數(shù)、真菌及酵母菌計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，試驗(yàn)菌回收率均能達(dá)到70%以上;銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌檢查實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)組呈陽(yáng)性反應(yīng)，陰性菌對(duì)照組呈陰性反應(yīng)。本文結(jié)果可為同類產(chǎn)品的微生物限度檢查方法驗(yàn)證提供科學(xué)的依據(jù)。
【參考文獻(xiàn)】
[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥：二部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄XIJ.
[2] 馬緒榮，蘇德模.抑菌性供試品的供試掖制備方法[J].藥品微生物學(xué)檢驗(yàn)手冊(cè),2001,2(2)：65.
[3] 王剛林，周劍.含抑制菌成分中成藥固體制劑微生物限度檢查驗(yàn)證方法的建立[J].中華實(shí)用醫(yī)藥雜志,2006,6(2):26.
[4] 桑國(guó)衛(wèi).中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2005：325.
[5] 林麗英，陳浩桉.大黃蟲(chóng)蟅丸微生物限度檢查法的建立[J].中藥新藥與臨床藥理,2006,17(7)：4.
【硝酸咪康唑搽劑微生物限度檢查法的建立】相關(guān)文章：
聯(lián)苯芐唑乳膠劑質(zhì)量10-05
曲安奈德益康唑霜在濕疹類皮膚病中的使用10-01
曲安奈德益康唑霜在濕疹類皮膚病中的應(yīng)用-醫(yī)學(xué)論文09-30
關(guān)于硝酸的教學(xué)方案10-08
頭孢唑肟鈉的合成論文10-09
愛(ài)的最大限度的英語(yǔ)作文10-08
夏朝的建立10-01