疣清顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

　　一篇畢業(yè)論文雖然不能全面地反映出一個(gè)人的才華，也不一定能對(duì)社會(huì)直接帶來(lái)巨大的效益，對(duì)專(zhuān)業(yè)產(chǎn)生開(kāi)拓性的影響。但是，實(shí)踐證明，撰寫(xiě)畢業(yè)論文是提高教學(xué)質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)，是保證出好人才的重要措施。

　　【摘要】 目的 建立疣清顆粒質(zhì)量控制方法。方法 采用薄層色譜法對(duì)制劑中香附、白芍進(jìn)行定性鑒別;對(duì)組方中有效成分黃芪甲苷用反相高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法(RP-HPLC-ELSD)進(jìn)行定量分析。結(jié)果 薄層色譜中斑點(diǎn)清晰,易于識(shí)別;RP-HPLC-ELSD法精密度、重現(xiàn)性良好,黃芪甲苷在1.032～5.16 μg范圍內(nèi)具有較好的線(xiàn)性關(guān)系,平均加樣回收率為99.051 6%,RSD=1.05%。結(jié)論 在本研究基礎(chǔ)上制定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可以控制本品的內(nèi)在質(zhì)量,方法是可行的。

　　【關(guān)鍵詞】 疣清顆粒;黃芪甲苷;反相高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法;薄層色譜法

　　疣清顆粒由黃芪、白芍、香附、薏苡仁等藥物組成,具有清熱解毒、托毒排膿、斂瘡生肌功效,主要用于治療尖銳濕疣等皮膚病。本試驗(yàn)采用薄層色譜法對(duì)方中黃芪、香附、白芍進(jìn)行薄層鑒別。黃芪是方中主藥,因此,選定黃芪甲苷為該制劑的含量測(cè)定項(xiàng)目,采用反相高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法(RP-HPLC-ELSD)進(jìn)行檢測(cè),以制定該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

　　1 儀器、試劑與藥品

　　日本島津HW-2000高效液相色譜儀(日本島津公司);KQ-500E型醫(yī)用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司);TD5A低速臺(tái)式離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)有限公司);AY220電子天平(島津);Lichropher C18(5 μm,4.6 mm ID×15 cm)色譜柱(淮陰漢邦科技有限公司;硅膠G(青島海洋化工廠(chǎng))。

　　黃芪甲苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào)為110781-200511)。黃芪、白芍、薏苡仁、香附等藥材購(gòu)自遼寧省藥材公司,經(jīng)鑒定,符合2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。疣清顆粒樣品自制,批號(hào)為060611,060613, 060615。甲醇為色譜純,其余所用試劑均為分析純。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 薄層色譜鑒別

　　2.1.1 白芍 [1]

　　取本品3 g,加乙醇10 mL,超聲處理10 min,濾過(guò),濾液蒸干,殘?jiān)�加乙�? mL使溶解,作為供試品溶液。另取白芍對(duì)照藥材0.5 g,同法制成對(duì)照藥材溶液。再取除白芍外的其它處方量藥材,按制備工藝制成缺白芍的陰性樣品,取適量陰性樣品同法制成缺白芍的陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗(yàn),分別吸取上述3種溶液10 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以二氯甲烷-甲醇-丙酮(8∶4∶2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以5%香草醛硫酸溶液,加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾。

　　2.1.2 香附[2]

　　取本品4.6 g,加溫水(50 ℃)30 mL,超聲處理10 min,水溶液用乙醚提取2次,每次30 mL,合并乙醚液,揮去乙醚,殘?jiān)�加醋酸乙�? mL使溶解,作為供試品溶液。另取香附對(duì)照藥材0.5 g,同法制成對(duì)照藥材溶液。另按處方及工藝分別制備不含香附的陰性樣品,同法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗(yàn),吸取上述溶液各5 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以二氯甲烷-甲苯(3∶2)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以2,4-二硝基苯肼乙醇試液,放置1 h,斑點(diǎn)漸變?yōu)槌燃t色,而陰性對(duì)照液在相應(yīng)位置上無(wú)此斑點(diǎn)。

　　2.2 黃芪甲苷的含量測(cè)定

　　2.2.1 色譜條件[3]

　　色譜柱為L(zhǎng)ichrospher C18(5 μm,4.6 mm ID×15 cm,淮陰漢邦科技有限公司);流動(dòng)相：甲醇-水(80∶20);流速：1 mL/min;柱溫：25 ℃。ELSD檢測(cè)溫度：92 ℃;氣體流量2.24 L/min。

　　2.2.2 對(duì)照品溶液的制備和線(xiàn)性關(guān)系的考察

　　精密稱(chēng)取黃芪甲苷對(duì)照品5.16 mg置于10 mL容量瓶中并定容至刻度,得到濃度為0.516 mg/mL的對(duì)照品溶液。分別取對(duì)照品溶液,用甲醇稀釋成0.103 2、0.206 4、0.309 6、0.412 8、0.516 mg/mL黃芪甲苷溶液,按上述色譜條件測(cè)定。以黃芪甲苷的進(jìn)樣量常用對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo),黃芪甲苷的峰面積常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),回歸得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：logA=0.779 133logC+7.380 524,r=0.999 973。結(jié)果表明,黃芪甲苷的進(jìn)樣量在1.032～5.16 μg范圍內(nèi),與其峰面積有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

　　2.2.3 供試品溶液的制備與測(cè)定

　　取疣清顆粒2.5 g,混勻,精密稱(chēng)定,置于錐形瓶中,加水50 mL,浸泡30 min,超聲波處理30 min,放冷,用水飽和正丁醇萃取3次(40、40、30 mL),分取正丁醇層置于上述分液漏斗中,加入40%氨試液洗滌2次,每次40 mL,棄去氨試液,分取正丁醇提取液,水浴蒸干,殘?jiān)�加蒸餾水3～5 mL溶解,放冷,通過(guò)D101大孔樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1.5 cm,長(zhǎng)12 cm),以水50 mL洗脫,棄去水液,再用40%乙醇30 mL洗脫,棄去40%乙醇洗脫液,繼續(xù)用70%乙醇50 mL洗脫,收集洗脫液,蒸干,用甲醇轉(zhuǎn)移并定容至5 mL容量瓶中。從該溶液中取一部分用0.45 μm微孔過(guò)濾器過(guò)濾后即得疣清顆粒供試品溶液。取上述供試品溶液10 μL注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積。

　　2.2.4 精密度考察

　　按選定的黃芪甲苷HPLC測(cè)定條件,精密吸取同一對(duì)照品溶液,進(jìn)樣10 μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定黃芪甲苷峰面積,結(jié)果RSD=1.19%(n=6)。

　　2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

　　精確稱(chēng)取疣清顆粒2.5 g,共6份,按上述供試品溶液的制備方法制備,各進(jìn)樣10 μL,每份樣品進(jìn)2針,測(cè)定黃芪甲苷峰面積,RSD=0.92%(n=6)。

　　2.2.6 穩(wěn)定性考察

　　將同一樣品溶液,在0、2、8、12、16、20 h分別進(jìn)樣10 μL,記錄峰面積,結(jié)果表明,峰面積的RSD=0.71%(n=6)。說(shuō)明供試品溶液在20 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

　　2.2.7 加樣回收率試驗(yàn)

　　取已測(cè)知含量的樣品適量,共6份,分別加入等同于樣品中黃芪甲苷含量80%、100%、120%的黃芪甲苷對(duì)照品,按“2.2.3”項(xiàng)下同法測(cè)定,用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 黃芪甲苷加樣回收率測(cè)定結(jié)果(略)

　　2.2.8 含量測(cè)定

　　取疣清顆粒3批樣品(自制,批號(hào)為060611、060613、060615),按供試品溶液制備方法制備樣品液,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,進(jìn)樣10 μL,每份重復(fù)進(jìn)樣2次,測(cè)定疣清顆粒中黃芪甲苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 疣清顆粒樣品含量測(cè)定結(jié)果(略)

　　3 討論

　　疣清顆粒中白芍、香附薄層鑒別與陰性對(duì)照品相比無(wú)干擾,且重現(xiàn)性較好。香附薄層色譜鑒別參照有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,噴以2,4-二硝基苯肼乙醇試液,放置片刻后斑點(diǎn)顯現(xiàn)不明顯,根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,需放置1 h后斑點(diǎn)漸顯,且在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)斑點(diǎn)明顯,不褪色。黃芪甲苷含量測(cè)定方法已報(bào)道有比色法、薄層掃描法、HPLC法等,其中HPLC法大多用紫外檢測(cè)器于203 nm處檢測(cè)。在預(yù)試驗(yàn)中,曾使用紫外檢測(cè)器檢測(cè),結(jié)果干擾較大,基線(xiàn)漂移嚴(yán)重,測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定,而改用RP-HPLC-ELSD進(jìn)行檢測(cè),空白無(wú)干擾,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,重現(xiàn)性好,適合于疣清顆粒的質(zhì)量控制。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　[1] 郭 煒,袁志芳,張?zhí)m桐.歸芍軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥,2006, 28(3)：351.

　　[2] 覃金玲,廖建維,馮靈平,等.逍遙婦樂(lè)顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2006,17(2)：127.

　　[3] 黎俊華.復(fù)方止血顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥房,2006,17(8)：615.

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