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小針刀對(duì)兔骨折愈合影響的實(shí)驗(yàn)研究論文
目的 探討小針刀對(duì)骨折愈合的影響及其作用機(jī)制。方法 取健康日本大耳白兔72只，造模后隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、空白對(duì)照組及干擾電流治療組；實(shí)驗(yàn)組于術(shù)后第3天開(kāi)始小針刀刺激骨折斷端，每周2次；空白組不做任何治療；干擾電療組于術(shù)后第1天開(kāi)始每天行電刺激治療。術(shù)后7、14、28、42 d行常規(guī)X線攝片和組織學(xué)檢查。結(jié)果 從X線片、組織學(xué)檢查顯示，小針刀治療組的骨痂形成速度、骨愈合成熟程度均優(yōu)于空白對(duì)照組，但與干擾電療組無(wú)明顯差異。結(jié)論 小針刀治療可促進(jìn)兔骨折愈合。〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To explore the effect and mechanism of small-needle-knife therapy for fracture coalescence. Methods Seventy-two rabbits were randomly divided into three groups as follows：experimental group, stimulating the broken end of the fracture by small-needle-knife at 3rd day after operation, two times a week; the control group accepted no treatment，and the electro-therapy group, electro-stimulating begin at 1st day after operation, one time a day. X-ray films and histological examination were made at 7th, 14th, 28th and 42nd day after operation. Results Both histological and X-ray examinations showed that the velocity of callus formation and qualities of healing process in the experimental group were significantly better than these in control group, and were not obvious difference compared with electro-therapy group. Conclusion The therapy of small-needle-knife can promote fracture coalescence in rabbits.
〔Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ〕 fracture-coalescence; small-needle-knife therapy; interference current; Healing process; rabbits格證號(hào)：SYXK(湘)2003-0001。
1.1.2 儀器 東方紅F30-IIF200maxX線攝片機(jī)（北京醫(yī)用射線機(jī)廠生產(chǎn)）；AO-820組織切片機(jī)（美國(guó)生產(chǎn)）；400倍奧林巴斯光學(xué)顯微鏡（日本生產(chǎn)）；小針刀為漢章牌（北京華夏針刀醫(yī)療器械廠）；自制手鋸；刺激器為調(diào)制成具有特定生理強(qiáng)度的干擾電流(自行設(shè)計(jì))，其電學(xué)參數(shù)為8.0 v，電流為9 mA，頻率恒定在4 000 Hz，電極用薄銀片制成，大小為4 mm×8 mm，電極的一端焊有15 cm的絕緣導(dǎo)線與刺激器連接。
1.1.3 試劑 烏拉坦、慶大霉素，均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。
1.2 方法
1.2.1 模型制備 實(shí)驗(yàn)兔用25%烏拉坦4 mL/kg耳緣靜脈麻醉后，常規(guī)右前腿剪毛、碘伏消毒，鋪無(wú)菌單，無(wú)菌條件下切開(kāi)皮膚，分離肌肉、血管、神經(jīng)等，暴露橈骨，于其中部用自制手鋸橫向鋸成3.0 mm的骨缺損骨折，骨折不固定，縫合皮膚，包扎傷口。術(shù)后慶大霉素4 mg/kg肌注3 d預(yù)防感染。
1.2.2 分組與飼養(yǎng) 造模后隨機(jī)分成3組：實(shí)驗(yàn)組、空白對(duì)照組、干擾電流組，每組24只。所有兔子進(jìn)行單籠并且統(tǒng)一由同一飼養(yǎng)員飼養(yǎng)。
1.2.3 處理 實(shí)驗(yàn)組術(shù)后第3天開(kāi)始，在無(wú)菌條件下繞開(kāi)皮膚切口以小針刀在骨折處前外側(cè)用搗刺和骨膜刮動(dòng)（每次每法治療8下）進(jìn)行刺激，每周2次，至第6周；空白對(duì)照組不做任何治療，其它處理同另外兩組；干擾電流組術(shù)后第1天開(kāi)始以干擾電流在骨折斷端遠(yuǎn)近兩側(cè)刺激兔子右前臂，1次/d，40 min/次。
1.2.4 外骨痂與骨折線評(píng)分及標(biāo)本采集 分別于術(shù)后第7、14、28、42 d分別處死各組中的6只兔，拍攝X線片后取骨折局部組織，10%福爾馬林固定，乙酸脫鈣，常規(guī)制成脫鈣石蠟切片，HE染色觀察。X線讀片采用盲法，評(píng)價(jià)兩項(xiàng)參數(shù)根據(jù)骨折愈合過(guò)程中外骨痂和骨折線的變化規(guī)律，將外骨痂和骨折線進(jìn)行如下半定量[1]：（1）外骨痂可定量為：0分：外骨膜無(wú)反應(yīng)；1分：外骨膜出現(xiàn)了反應(yīng)；2分：外骨痂大小或密度較前明顯提高；3分：外骨痂連在一起形成皮質(zhì)骨橋；4分：外骨痂輕度吸收；5分：外骨痂明顯吸收；6分：外骨痂接近完全吸收，骨折處皮質(zhì)骨密度接近正常皮質(zhì)骨；（2）骨折線可定量為：0分：骨折線清晰無(wú)變化；2分：骨折線開(kāi)始變模糊；4分：骨折線模糊未消失，但出現(xiàn)較牢固的連接跡象；6分：骨折線已消失，骨折線被高密度的骨痂取代；8分：骨髓腔密度開(kāi)始減低；10分：骨髓腔處密度明顯減低；12分：骨髓腔完全再通，將上述兩側(cè)外骨痂和骨折線參數(shù)評(píng)分相加即為骨折愈合的X線評(píng)分。
1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ｘ±ｓ）表示，組間比較用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析，使用SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
2 結(jié)果
2.1 一般情況觀察
術(shù)后動(dòng)物精神狀態(tài)、食欲及活動(dòng)均良好，傷口愈合良好，無(wú)死亡，小針刀及干擾電流治療順利。
2.2 小針刀對(duì)兔骨折外骨痂與骨折線X線片的影響
實(shí)驗(yàn)組7 d（圖1①），骨折線模糊，骨膜反應(yīng)明顯，部分可見(jiàn)少量外骨痂； 14 d（圖1④），外骨痂量較多，骨折間隙密度增高，部分骨折線呈現(xiàn)較牢固連接跡象； 28 d（圖1⑤），外骨痂開(kāi)始吸收，骨折線消失，被高密度的骨痂取代； 42 d（圖1⑥），外骨痂明顯吸收，骨折處皮質(zhì)骨密度接近正常皮質(zhì)骨，骨髓腔完全再通�？瞻讓�(duì)照組7 d（圖1①），骨折線清晰，骨膜反應(yīng)輕；14 d（圖1③），骨折線模糊，出現(xiàn)少量外骨痂，骨折線尚未出現(xiàn)牢固連接跡象；28 d，大量的外骨痂，骨折線出現(xiàn)牢固連接跡象，但外骨痂無(wú)吸收；42 d，骨折線消失，外骨痂開(kāi)始吸收，髓腔未再通。干擾電流組照片情況和實(shí)驗(yàn)組大致相同。3組參數(shù)總的評(píng)分實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組有明顯的差異（P<0.05），但實(shí)驗(yàn)組與干擾電療組無(wú)明顯差異(P>0.05)。見(jiàn)表1。
2.3 組織學(xué)檢查
�。辰M動(dòng)物的骨折愈合都經(jīng)歷了血腫機(jī)化、纖維性骨痂、軟骨性骨痂、骨性骨痂４個(gè)病理階段。7 d：實(shí)驗(yàn)組骨折斷端間血腫被肉芽組織取代，大部分已經(jīng)機(jī)化形成纖維組織連接，骨內(nèi)外膜骨樣組織增生；空白對(duì)照組，肉芽組織少，機(jī)化較差，血腫仍存在，斷端骨內(nèi)外膜軟骨初現(xiàn)（圖2①）；干擾電療組骨折斷端血腫被肉芽組織取代，較多的纖維組織連接，骨內(nèi)外膜骨樣組織增生活躍。14 d：實(shí)驗(yàn)組和干擾電流組骨折斷端間纖維骨痂明顯減少，軟骨骨痂明顯增多，邊緣出現(xiàn)了鈣化和骨化，骨外膜增生明顯，出現(xiàn)大量軟骨性骨痂并且出現(xiàn)部分骨小梁（圖2②）；空白對(duì)照組骨折斷端主要以纖維骨痂為主，部分肉芽組織尚未完全被纖維組織取代，內(nèi)外骨痂少，外骨痂較前兩組薄。28 d：實(shí)驗(yàn)組骨折斷端可見(jiàn)大量骨小梁，并且骨小梁排列有一定方向性，且較規(guī)則，骨小梁周圍出現(xiàn)一層排列整齊的骨母細(xì)胞，周邊炎癥細(xì)胞消失（圖2④）；空白對(duì)照組斷端骨痂中仍有纖維組織和軟骨化骨成分，炎癥細(xì)胞仍然存在（圖2③）。42 d：實(shí)驗(yàn)組骨小梁似正常大小、排列規(guī)則，髓腔改建基本完成，髓腔再通（圖2⑥）；空白對(duì)照組出現(xiàn)大量骨小梁，但外骨痂尚未完全橋接，骨折端外骨痂中嵌有部分纖維軟骨，髓腔改建未完成，髓腔未再通（圖2⑤）。
3 討論
綜合各項(xiàng)指標(biāo)分析，小針刀治療組骨折愈合情況在各個(gè)時(shí)相都優(yōu)于空白對(duì)照組，特別是第14天有顯著差異。但小針刀治療與干擾電流治療組無(wú)明顯差異。
在X線片上，骨折線的模糊程度基本反應(yīng)了骨痂變化，采取上述評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，半定量分析骨折愈合情況，外骨痂評(píng)分說(shuō)明骨外膜形成和塑性情況，骨折線模糊程度反應(yīng)了骨痂形成及塑性變化。這個(gè)評(píng)分近似地反映骨折愈合過(guò)程的各個(gè)階段變化，從而有利于比較各組骨折愈合程度。根據(jù)外骨痂及骨折線X線片評(píng)分，實(shí)驗(yàn)組愈合程度明顯優(yōu)于空白對(duì)照組（P<0.05），但和干擾電流組無(wú)明顯差異。從影像上證明了小針刀治療能加速骨痂形成與鈣化，加快骨塑形，提高骨折愈合速度。
在組織學(xué)上骨折愈合都經(jīng)歷血腫機(jī)化、纖維性骨痂、軟骨性骨痂、骨性骨痂4個(gè)病理階段，通過(guò)對(duì)本次實(shí)驗(yàn)各個(gè)階段組織切片的觀察，實(shí)驗(yàn)組和干擾電流組都能較空白對(duì)照組提前機(jī)化血腫，纖維、軟骨、骨性骨痂的生長(zhǎng)情況都優(yōu)于空白對(duì)照組，髓腔亦較后者提前再通。
小針刀作為一種物理刺激治療手段，其促進(jìn)骨折愈合的機(jī)制可能是：①促進(jìn)局部血液及淋巴循環(huán)，以增加病灶部位的營(yíng)養(yǎng)，也加快了壞死和瘢痕組織的吸收［2］。實(shí)驗(yàn)證實(shí)小針刀治療組炎癥消退時(shí)間，纖維性、軟骨性、骨性骨痂及破骨細(xì)胞出現(xiàn)時(shí)間較空白對(duì)照組提前。②加強(qiáng)誘導(dǎo)成骨［3］，通過(guò)觀察組織切片，小針刀治療組骨膜下成骨優(yōu)于空白對(duì)照組，部分X片（圖2-6）顯示：通過(guò)小針刀刺激骨膜外形成骨樣贅生物。③通過(guò)對(duì)病變部位較強(qiáng)的刺激，以提高局部組織的興奮性，調(diào)動(dòng)機(jī)體生物能康復(fù)系統(tǒng)，促進(jìn)組織修復(fù)［4］。實(shí)驗(yàn)證實(shí)小針刀治療組動(dòng)物活動(dòng)性和食欲較空白對(duì)照組好。④調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)，使機(jī)體各種激素分泌處于向機(jī)體有益的方向發(fā)展［5］。⑤小針刀作用被概括為“剝離粘連、疏通阻滯、流通氣血、刮除疤痕、松解肌肉、鎮(zhèn)驚止痛”［6］，組織切片證實(shí)：同時(shí)相小針刀治療組血腫機(jī)化比空白對(duì)照組好，內(nèi)外骨痂比空白對(duì)照組增多，骨痂吸收和髓腔再通時(shí)間亦較前者提前。
小針刀對(duì)骨折愈合的影響國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)小針刀對(duì)新鮮骨折有一定療效，同樣也開(kāi)辟了小針刀的新用途并且豐富了促進(jìn)骨折愈合治療的手段。
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